Jamur tiram putih (Pleurotus ostreatus) dan jamur shiitake (Lentinula edodes) merupakan jenis jamur yang dapat dikonsumsi dan memiliki kandungan protein yang paling tinggi di antara jenis jamur lain. Kedua jenis jamur memilikimetabolit sekunder yang dimanfaatkan sebagai senyawa antibakteri dan mencegah pertumbuhan mikroorganisme patogen. Tujuan penelitian ini adalah meneliti hasil ekstrak jamur yang terbaik dengan perlakuan jenis pelarut dan rasio kedua jenis jamur serta mengetahui metode pengawetan dan konsentrasi yang terbaik dari kedua jenis ekstrak jamur untuk daya hambat mikroorganisme patogen yang dapat merusak daging ayam selama penyimpanan pada suhu dingin dan ruang. Ekstrak jamur tiram putih dan jamur shiitake diekstraksi menggunakan pelarut air dan etil asetat dengan metode maserasi selama 24 jam pada suhu ruang. Rasio ekstrak jamur tiram putih dan jamur shiitake adalah 0:100, 100:0, 50:50, 80:20, 20:80, 60:40 dan 40:60. Rasio yang terbaik adalah 50:50 pada penghambatan bakteri Escherichia coli ATCC 8739, Staphylococcus aureus ATCC 25923, Salmonella Typhi ATCC 14028 dan Campylobacter jejuni ATCC 51329. Kedua jenis jamur memiliki komponen fitokimia yang sama yaitu alkaloid, fenolik, saponin, tanin, flavonoid, triterpenoid dan glikosida. Ekstrak pada pH asam (4-6) memiliki diameter penghambatan lebih besar dibandingkan pH netral (7) dan pH basa (8). Penambahan garam pada ekstrak 1-5% memiliki diameter penghambatan lebih kecil dari kontrol (0%). Metode perendaman pada pengawetan daging ayam dan konsentrasi ekstrak 20% selama penyimpanan pada suhu ruang dan suhu dingin memiliki nilai Total Plate Count, total E. coli, total S. aureus, total S. Typhi dan total C. jejuni lebih kecil dibandingkan metode pembaluran dan konsentrasi 0%, 5%, 10%, 15% dan 20%. Penyimpanan daging ayam pada suhu dingin memberikan nilai total E. coli, total S. aureus, total S. Typhi dan total C. jejuni yang lebih kecil dibandingkan suhu ruang.