Salah satu tanaman yang digunakan untuk obat tradisional adalah tanaman papaya jepang. Ekstrak daun pepaya jepang dapat digunakan sebagai antidiabetes dengan dosis efektif 100-300mg/KgBB. Dalam penggunaan obat herbal, perlu diketahui keamanannya agar tidak menimbulkan efek berbahaya yang tidak diinginkan. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui efek toksisitas dan menentukan nilai LD50 ekstrak etanol daun pepaya jepang (Cnidoscolus aconitifolius (Mill.) IM.Johnst.) pada mencit jantan, sehingga dapat mengetahui batas dosis aman yang dapat digunakan untuk ekstrak etanol daun pepaya jepang. Ekstrak daun C. aconitifolius diperoleh dengan cara remaserasi menggunakan etanol 96%. Uji toksisitas akut menggunakan metode OECD 423. Masing-masing kelompok menggunakan 3 hewan uji mencit jantan. Dosis awal yang digunakan 300 mg/KgBB, dilanjutkan dosis 2000 mg/KgBB. Pengamatan dilakukan 4 jam setelah perlakukan dengan melihat gejala fisik (sianosis, kejang, groming, whriting, straub, dan kematian) kemudian dilakukan pengamatan setelah 24 jam dilanjutkan sampai 14 hari dengan melihat jumlah kematian hewan uji. Penetapan nilai LD50 dilakukan dengan mengacu kepada metode Globally Harmonized Classification System (GHCS). Hasil dari penelitian diketahui bahwa tidak ada gejala fisik maupun kerusakan organ pada hewan uji serta tidak ada satu pun hewan uji yang mati pada seluruh kelompok (kontrol CMC Na, 300 mg/KgBB, dan 2000 mg/KgBB). Sehingga ekstrak daun C. aconitifolius dapat dikatakan tidak mempunyai efek toksik dan termasuk ke dalam golongan nilai LD50 kategori V yaitu tidak terklasifikasikan dengan dosis toksik >5000 mg/KgBB.